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## L414-801KR 操作规程
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检验依据：QAS-ZJ414-801KR-09
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### 1. 相关物质
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#### 1.1. 色谱条件
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色谱柱型号：Agilent Zorbax Eclipse plus C18
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色谱柱规格：100mm x 4.6mm x 3.5 um
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捕集小柱型号：Welch Ghost-Buster
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捕集小柱规格：4.6mm x 50mm
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流速：1.2 mL/min
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波长：254 nm
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运行时间：36 min
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后运行时间：8 min
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柱温：40 °C
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进样量：5 uL
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流动相A：20mM 乙酸铵水溶液（用乙酸调 pH=5.7±0.5）
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流动相B：乙腈
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梯度程序：
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| 时间(min) | A% | B% |
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| :-------: | :---: | :---: |
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| 0 | 75 | 25 |
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| 20 | 55 | 45 |
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| 26 | 20 | 80 |
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| 30 | 20 | 80 |
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| 31 | 75 | 25 |
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| 36 | 75 | 25 |
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#### 1.2. 样品配置
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~~**溶剂**：乙腈:水=55:45~~
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**溶剂**：乙腈:水=8:2
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**杂质储备液**：称取 10mg L414-5KR 对照品于 100mL 容量瓶中，定容。
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**LOQ 溶液**：称取 10mg L414-801KR 对照品于 100mL 容量瓶中，定容。移取上述溶液 0.5mL 于 100mL 容量瓶中，定容。
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**SST 溶液**：称取 50mg L414-801KR 对照品于 50mL 容量瓶中，加入 1mL 杂质储备液，定容。
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**对照品溶液**：称取 25mg L414-801KR 对照品于 25mL 容量瓶中，定容。移取上述溶液 0.1mL 于 50mL 容量瓶中，定容。
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**样品溶液**：称取 25mg 样品于 25mL 容量瓶中，定容。
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#### 1.3. 容量瓶用量
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配置全部溶液时：
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| 规格(mL) | 数量 |
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| :------: | :---: |
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| 100 | 3 |
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| 50 | 2 |
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| 25 | 2 |
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仅配置**对照品溶液**与**样品溶液**时：
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| 规格(mL) | 数量 |
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| :------: | :---: |
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| 50 | 1 |
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| 25 | 2 |
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**Note**: 每多一批样品则多加 1 个 25mL 容量瓶
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#### 1.4. 进样顺序
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+ 空白
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+ LOQ 溶液
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+ SST 溶液
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+ 空白
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+ 对照品溶液
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+ 样品溶液
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#### 1.5. 系统适用性要求
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+ LOQ 溶液图谱中 S/N ≥ 10
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+ SST 溶液图谱中主峰与相邻杂质峰的分离度 ≥ 1.5
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+ SST 溶液图谱中已知杂质峰与相邻未知杂质峰的分离度 ≥ 1.0
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#### 1.6. 标准要求
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+ L414-5KR ≤ 0.2%
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+ RRT~0.96 杂质 ≤ 1.0%
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+ 单个未知单杂 ≤ 0.2%
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+ 杂质总量 ≤ 1.0%
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### 2. S-异构体
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参照中控检测数据。
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### 3. 三苯基氧膦和 TEMPO
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#### 3.1. 色谱条件
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色谱柱型号：Agilent Zorbax Eclipse plus C18
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色谱柱规格：100mm x 4.6mm x 3.5 um
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流速：1.2 mL/min
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波长：三苯基氧膦 (220nm) / TEMPO (224nm)
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运行时间：15 min
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后运行时间：13 min
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柱温：40 °C
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进样量：10 uL
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流动相A：0.1% 磷酸水溶液
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流动相B：乙腈
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梯度程序：
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| 时间(min) | A% | B% |
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| :-------: | :---: | :---: |
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| 0 | 60 | 40 |
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| 8 | 60 | 40 |
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| 10 | 10 | 90 |
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| 14 | 10 | 90 |
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| 15 | 60 | 40 |
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#### 3.2. 样品配置
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**溶剂**：乙腈:水=9:1
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**杂质储备液**：称取
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15mg 三苯基氧膦对照品
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50mg TEMPO 对照品
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于 100mL 容量瓶中，定容。
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**对照品溶液**：移取**杂质储备液** 0.5mL 于 50mL 容量瓶中，定容。
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**样品溶液**：称取 25mg 样品于 25mL 容量瓶中，定容。
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#### 3.3. 容量瓶用量
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| 规格(mL) | 数量 |
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| :------: | :---: |
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| 100 | 1 |
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| 50 | 1 |
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| 25 | 1 |
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每多一批样品则多加 1 个 25mL 容量瓶
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#### 3.4. 进样顺序
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+ 空白
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+ 对照品溶液
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+ 样品溶液
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#### 3.5. 标准要求
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+ 三苯基氧膦 ≤ 0.15%
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+ TEMPO ≤ 0.5%
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### 4. 含量
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#### 4.1. 色谱条件
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色谱柱型号：Agilent Zorbax Eclipse plus C18
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色谱柱规格：100mm x 4.6mm x 3.5 um
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流速：1.0 mL/min
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波长：254 nm
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运行时间：25 min
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柱温：40 °C
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进样量：5 uL
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流动相A：水:乙腈:三氟乙酸=950:50:1
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流动相B：乙腈:三氟乙酸=1000:1
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梯度程序：
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| 时间(min) | A% | B% |
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| :-------: | :---: | :---: |
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| 0 | 45 | 55 |
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| 25 | 45 | 55 |
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#### 4.2. 样品配置
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**溶剂**：乙腈:水=9:1
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**对照品溶液**：称取 20mg L414-801KR 对照品（两份）于 50mL 容量瓶中，定容。
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**样品溶液**：称取 20mg 样品（两份）于 50mL 容量瓶中，定容。
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#### 4.3. 容量瓶用量
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| 规格(mL) | 数量 |
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| :------: | :---: |
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| 50 | 4 |
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每多一批样品则多加 2 个 50mL 容量瓶
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#### 4.4. 进样顺序
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+ 空白
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+ 对照品溶液 1
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+ 样品溶液 1
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+ 样品溶液 2
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+ 对照品溶液 2
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#### 4.5. 系统适用性要求
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+ 对照品溶液 2 相对于对照品溶液 1 的回收率在 98.0% - 102.0%
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#### 4.6. 标准要求
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+ 含量在 98.0% - 102.0%
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