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L414-5KR 操作规程

检验依据：QAS-ZJ414-5KR-03

1. 相关物质及含量

1.1. 色谱条件

色谱柱：C18, 250mm x 4.6mm x 5um 流速：1.0 mL/min 波长：210 nm 运行时间：40 min 后运行时间：13 min 柱温：25 °C 进样量：5 uL 流动相A：0.1% 磷酸水溶液 流动相B：甲醇

梯度程序：

时间(min)	A%	B%
0	50	50
10	25	75
18	25	75
25	5	95
40	5	95

1.2. 样品配置

溶剂：甲醇 杂质储备液 1 ：称取 15mg L414-3KR 于 250mL 容量瓶中，定容。 杂质储备液 2 ：称取 10mg L414-4KR 于 100mL 容量瓶中，定容。 杂质储备液 3 ：称取 10mg L414-5IM 于 100mL 容量瓶中，定容。

LOQ 溶液：移取     0.5mL 杂质储备液 1     1.0mL 杂质储备液 2     1.0mL 杂质储备液 3 于 100mL 容量瓶中，定容。

SST 溶液：称取 10mg 样品于 10mL 容量瓶中，加入     0.5mL 杂质储备液 1     0.2mL 杂质储备液 2     1.0mL 杂质储备液 3 定容。

相关物质样品溶液：称取 10mg 样品（两份）于 10mL 容量瓶中，定容。 对照品溶液：称取 10mg L414-5KR 对照品（两份）于 100mL 容量瓶中，定容。 含量样品溶液：称取 10mg 样品（两份）于 100mL 容量瓶中，定容。

1.3. 容量瓶用量

规格(mL)	数量
250	1
100	7
10	3

每多一批样品则多加 2 个 100 mL 容量瓶、 2 个 10 mL 容量瓶

1.4. 进样顺序

• 空白
• LOQ 溶液
• SST 溶液
• 相关物质样品溶液 1
• 相关物质样品溶液 2
• 空白
• 对照品溶液 1-1
• 对照品溶液 1-2
• 对照品溶液 1-3
• 对照品溶液 1-4
• 对照品溶液 1-5
• 对照品溶液 2
• 含量样品溶液 1
• 含量样品溶液 2
• 对照品溶液 1-6

1.5. 系统适用性要求

• 样品溶液图谱中主峰保留时间于对照品一致
• LOQ 溶液图谱中 L414-3KR、L414-4KR、L414-5IM 的 S/N ≥ 10
• SST 溶液图谱中主峰的理论塔板数 ≥ 2000
• SST 溶液图谱中主峰的拖尾因子 ≤ 2.0
• SST 溶液图谱中 L414-3KR、L414-4KR、L414-5IM 与主峰之间的分离度 ≥ 1.0
• 对照品溶液 1 前 5 针主峰峰面积 RSD ≤ 1.0%
• 对照品溶液 1 与 对照品溶液 2 的 f 值之比在 99% - 101%

1.6. 标准要求

• 含量 98% - 102%
• L414-3KR ≤ 0.3%
• L414-4KR ≤ 0.2%
• L414-5IM ≤ 1.0%
• 最大未知杂质 ≤ 0.50%
• 杂质总量 ≤ 2.0%
• 纯度 ≥ 98%

2. 手性纯度

2.1. 色谱条件

色谱柱：AD-H, 250mm x 4.6mm x 5um 流速：1.0 mL/min 波长：210 nm 运行时间：30 min 柱温：25 °C 进样量：5 uL 流动相：正己烷:0.2%三氟乙酸乙醇=90:10

2.2. 样品配置

溶剂：乙醇 杂质储备液：称取 10mg L414-5S 异构体对照品于 100mL 容量瓶中，定容。 LOQ 溶液：移取 50uL 杂质储备液于 10mL 容量瓶中，定容。 SST 溶液：称取 10mg 样品于 10mL 容量瓶中，加入 0.5mL 杂质储备液，定容。 样品溶液：称取 10mg 样品于 10mL 容量瓶中，定容。

2.3. 容量瓶用量

规格(mL)	数量
100	1
10	3

每多一批样品则多加 1 个 10 mL 容量瓶

2.4. 进样顺序

• 空白
• LOQ 溶液
• SST 溶液
• 样品溶液

2.5. 系统适用性要求

• LOQ 溶液图谱中 L414-5S 异构体的 S/N ≥ 10
• SST 溶液图谱中 L414-5KR 的理论塔板数 > 2000
• SST 溶液图谱中 L414-5KR 的拖尾因子 < 2.0
• SST 溶液图谱中 L414-5S 与 L414-5KR 的分离度 ≥ 1.5

2.6. 标准要求

• 手性纯度 ≥ 99.5%

3. 干燥失重

3.1. 条件

50 °C，抽真空

3.2. 标准要求

干燥失重 ≤ 0.5%