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## L414-801KR 操作规程

检验依据：QAS-ZJ414-801KR-05

### 1. 相关物质

#### 1.1. 色谱条件

色谱柱型号：Agilent Zorbax Eclipse plus C18
色谱柱规格：100mm x 4.6mm x 3.5 um
捕集小柱型号：Welch Ghost-Buster
捕集小柱规格：4.6mm x 50mm
流速：1.2 mL/min
波长：254 nm
运行时间：36 min
后运行时间：8 min
柱温：40 °C
进样量：5 uL
流动相A：20mM 乙酸铵水溶液（用乙酸调 pH=5.7±0.5）
流动相B：乙腈

梯度程序：

| 时间(min) |  A%   |  B%   |
| :-------: | :---: | :---: |
|     0     |  75   |  25   |
|    20     |  55   |  45   |
|    26     |  20   |  80   |
|    30     |  20   |  80   |
|    31     |  75   |  25   |
|    36     |  75   |  25   |

#### 1.2. 样品配置

**溶剂**：乙腈:水=55:45

**杂质储备液**：称取 10mg L414-5KR 对照品于 100mL 容量瓶中，定容。

**LOQ 溶液**：称取 10mg L414-801KR 对照品于 100mL 容量瓶中，定容。移取上述溶液 0.5mL 于 100mL 容量瓶中，定容。

**SST 溶液**：称取 50mg L414-801KR 对照品于 50mL 容量瓶中，加入 1mL 杂质储备液，定容。

**对照品溶液**：称取 50mg L414-801KR 对照品于 50mL 容量瓶中，定容。移取上述溶液 0.2mL 于 100mL 容量瓶中，定容。

**样品溶液**：称取 50mg 样品于 50mL 容量瓶中，定容。

#### 1.3. 容量瓶用量

| 规格(mL) | 数量  |
| :------: | :---: |
|   100    |   4   |
|    50    |   3   |

每多一批样品则多加 1 个 50mL 容量瓶

#### 1.4. 进样顺序

+ 空白
+ LOQ 溶液
+ SST 溶液
+ 空白
+ 对照品溶液
+ 样品溶液

#### 1.5. 系统适用性要求

+ LOQ 溶液图谱中 S/N ≥ 10
+ SST 溶液图谱中主峰与相邻杂质峰的分离度 ≥ 1.5
+ SST 溶液图谱中已知杂质峰与相邻未知杂质峰的分离度 ≥ 1.0

#### 1.6. 标准要求

+ L414-5KR ≤ 0.2%
+ RRT~0.96 杂质 ≤ 1.0%
+ 单个未知单杂 ≤ 0.2%
+ 杂质总量 ≤ 1.0%

### 2. S-异构体

#### 2.1. 色谱条件

色谱柱型号：Daicel Chiral Pak IG
色谱柱规格：250mm x 4.6mm x 5 um
流速：0.6 mL/min
波长：254 nm
运行时间：30 min
柱温：35 °C
进样量：10 uL
流动相：正己烷:乙醇:异丙醇:三氟乙酸=80:10:10:0.1

#### 2.2. 样品配置

**溶剂**：乙醇

**杂质储备液**：称取 10mg L414-801 S-异构体对照品于 100mL 容量瓶中，定容。

**LOQ 溶液**：称取 10mg L414-801KR 对照品于 100mL 容量瓶中，定容。移取上述溶液 0.2mL 于 100mL 容量瓶中，定容。

**SST 溶液**：称取 25mg 样品于 25mL 容量瓶中，加入 2.5mL 杂质储备液，定容。

**对照品溶液**：称取 25mg L414-801KR 对照品于 25mL 容量瓶中，定容。移取上述溶液 1mL 于 100mL 容量瓶中，定容。

**样品溶液**：称取 25mg 样品于 25mL 容量瓶中，定容。

#### 2.3. 容量瓶用量

| 规格(mL) | 数量  |
| :------: | :---: |
|   100    |   4   |
|    25    |   3   |

每多一批样品则多加 1 个 25mL 容量瓶

#### 2.4. 进样顺序

+ 空白
+ LOQ 溶液
+ SST 溶液
+ 空白
+ 对照品溶液
+ 样品溶液

#### 2.5. 系统适用性要求

+ LOQ 溶液图谱中 S/N ≥ 10
+ SST 溶液图谱中 R-异构体与 S-异构体之间的分离度 ≥ 2.0

#### 2.6. 标准要求

+ S-异构体 ≤ 1.0%

### 3. 三苯基氧膦和 TEMPO

#### 3.1. 色谱条件

色谱柱型号：Agilent Zorbax Eclipse plus C18
色谱柱规格：100mm x 4.6mm x 3.5 um
流速：1.2 mL/min
波长：三苯基氧膦 (220nm) / TEMPO (224nm)
运行时间：15 min
后运行时间：13 min
柱温：40 °C
进样量：10 uL
流动相A：0.1% 磷酸水溶液
流动相B：乙腈

梯度程序：

| 时间(min) |  A%   |  B%   |
| :-------: | :---: | :---: |
|     0     |  60   |  40   |
|     8     |  60   |  40   |
|    10     |  10   |  90   |
|    14     |  10   |  90   |
|    15     |  60   |  40   |

#### 3.2. 样品配置

**溶剂**：乙腈:水=9:1

**杂质储备液**：称取
         15mg 三苯基氧膦对照品
         50mg TEMPO 对照品
于 100mL 容量瓶中，定容。

**对照品溶液**：移取杂质储备液 1mL 于 100mL 容量瓶中，定容。

**样品溶液**：称取 50mg 样品于 50mL 容量瓶中，定容。

#### 3.3. 容量瓶用量

| 规格(mL) | 数量  |
| :------: | :---: |
|   100    |   2   |
|    50    |   1   |

每多一批样品则多加 1 个 50mL 容量瓶

#### 3.4. 进样顺序

+ 空白
+ 对照品溶液
+ 样品溶液

#### 3.5. 标准要求

+ 三苯基氧膦 ≤ 0.15%
+ TEMPO ≤ 0.5%

### 4. 含量

#### 4.1. 色谱条件

色谱柱型号：Agilent Zorbax Eclipse plus C18
色谱柱规格：100mm x 4.6mm x 3.5 um
流速：1.0 mL/min
波长：254 nm
运行时间：25 min
柱温：40 °C
进样量：5 uL
流动相A：水:乙腈:三氟乙酸=950:50:1
流动相B：乙腈:三氟乙酸=1000:1

梯度程序：

| 时间(min) |  A%   |  B%   |
| :-------: | :---: | :---: |
|     0     |  45   |  55   |
|    25     |  45   |  55   |

#### 4.2. 样品配置

**溶剂**：乙腈:水=9:1

**对照品溶液**：称取 40mg L414-801KR 对照品（两份）于 100mL 容量瓶中，定容。

**样品溶液**：称取 40mg 样品（两份）于 100mL 容量瓶中，定容。

#### 4.3. 容量瓶用量

| 规格(mL) | 数量  |
| :------: | :---: |
|   100    |   4   |

每多一批样品则多加 2 个 100mL 容量瓶

#### 4.4. 进样顺序

+ 空白
+ 对照品溶液 1-1
+ 对照品溶液 1-2
+ 对照品溶液 1-3
+ 对照品溶液 1-4
+ 对照品溶液 1-5
+ 对照品溶液 2
+ 样品溶液 1
+ 样品溶液 2
+ 空白
+ 对照品溶液 1-6

#### 4.5. 系统适用性要求

+ 六针对照品溶液 1 主峰峰面积的 RSD ≤ 2.0%
+ 前五针对照品溶液 1 主峰峰面积的 RSD ≤ 2.0%
+ 对照品溶液 2 相对于前五针对照品溶液 1 的回收率在 98.0% - 102.0%

#### 4.6. 标准要求

+ 含量在 98.0% - 102.0%